 
|
Рентабельный Sequencing набор конструкции библиотеки от китайских изготовителей
Подробная информация о продукте:
| Место происхождения: | Китай |
| Фирменное наименование: | GDSBio |
| Сертификация: | ISO9001, ISO13485 |
| Номер модели: | KM001-A, KM001-B |
Оплата и доставка Условия:
| Количество мин заказа: | 1 набор |
|---|---|
| Цена: | US $0.2-0.75 / Piece |
| Упаковывая детали: | Упаковка коробки |
| Время доставки: | дни 8work |
| Условия оплаты: | L/C, D/A, D/P, T/T, западное соединение, MoneyGram |
| Поставка способности: | 5000 наборов/неделя |
|
Подробная информация |
|||
| Кот. Нет.: | KM001-A, KM001-B | Спецификация трубки: | Rxns KM001-A/24; Rxns KM001-B/96 |
|---|---|---|---|
| Sequencing платформа: | MGI | Материал входного сигнала: | ДНК |
| Срок годности при хранении: | 12 месяца | Хранение: | -20°C |
| Высокий свет: | Трубка забора вируса инактивирования устранимая,Трубка забора вируса УПРАВЛЕНИЯ ПО САНИТАРНОМУ НАДЗОРУ ЗА КАЧЕСТВОМ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И МЕДИКАМЕНТОВ устранимая,VTM деактивировало трубку забора вируса |
||
Характер продукции
Быстрый набор приготовления уроков библиотеки ДНК для MGI
[Название продукта]
Быстрый набор приготовления уроков библиотеки ДНК для MGI
[Кот. Нет/спецификации.]
Rxns KM001-A/24; Rxns KM001-B/96; rxns мешка 6 образца
[Характер продукции]
Направляющ на высоко-объем MGI sequencing платформа, этот набор обеспечивает удобную и всеобщую схему конструкции библиотеки ДНК в одной трубке. Он совмещает ремонт конца и -замыкать в один шаг, и реагенты сильно смешаны заранее, значительно сокращая время конструкции библиотеки и уменьшая ошибку причиненную нудными шагами. Подготовку конца, перешнуровку переходника, амплификацию и очищение разделенной, который двух-сели на мель ДНК можно выполнить в пределах около 2 часов. Полная квантификация библиотеки может быть выполнена методом люминесцентной краски dsDNA (например, термо- флуорометром гибкого трубопровода Qubit) или абсолютным PCR квантификации после разбавлять библиотеку к соотвествующей концентрации.
[Тип образца]
| Применение | Тип образца | Порекомендованное количество |
| Весь sequencing генома | Высококачественные сложные геномы | 50ng-1μg |
| Sequencing захвата цели всего exome | Высококачественные сложные геномы | 10ng-1μg |
| Sequencing захвата цели всего генома | ДНК FFPE | ≥50ng |
| Sequencing захвата цели всего генома | cfDNA/ctDNA | ≥100pg |
| Весь sequencing генома | Микробный геном | 1ng-1μg |
| Обломок-Seq | ДНК обломока | ≥100pg |
| Прицеленный sequencing | Amplicon | ≥100pg |
[Условие & срок годности при хранении хранения]
Все реагенты следует сохранить на буфере перешнуровки -20°C. нормальны для кристаллов для того чтобы осадить на низких температурах, ем должны быть сбалансированы к комнатной температуре перед использованием. Продукт действителен на 12 месяца.
[Компоненты]
| Компонент | 24 rxns | 96 rxns |
| Ремонт конца & смешивание -замыкать | μl 480 | μl 4×480 |
| Быстрая лигаза ДНК | μl 120 | μl 2×240 |
| Быстрый буфер перешнуровки | μl 600 | μl 4×600 |
| Смешивание PCR HIFI библиотеки 2× мастерское | μl 600 | μl 4×600 |
| Смешивание праймера для MGI* | μl 120 | μl 480 |
* если больше чем один образец, то порекомендовано смешивание праймера переходника #KM002 и #KM003. Этот набор обеспечивает набор праймеров.
Примечание: порекомендованные шарики выбора: Шарики выбора Magbeads или AMPure XP ДНК #NC1011 GDSPure.
[Примечания]
1. Мы предлагаем 2 типа всеобщего набора праймеров переходника (#KM002 и #KM003, купленного отдельно), но клиенты могут также выбрать от других изготовителей или синтезировать их собственный переходник для MGI sequencing платформа. Слишком много переходника приведет к образованию димера переходника, и недостаточный переходник приведет к низкому выходу библиотеки. Поэтому, соотвествующая концентрация переходника определяет концентрацию и качество библиотеки. Порекомендованная концентрация переходника для различного количества входного сигнала ДНК показана в следующей таблице:
Порекомендованная таблица 1 использует концентрацию переходника
| Входной сигнал ДНК | Порекомендованное conc для переходника | Переходник: Коэффициент моли вставки | Разбавление Degrees* переходника GDS |
| 1μg | 10μM | 10:1 | Отсутствие разбавления |
| 500ng | 10μM | 20:1 | Отсутствие разбавления |
| 250ng | 10μM | 40:1 | Отсутствие разбавления |
| 100ng | 7.5μM | 100:1 | 3:4 |
| 50ng | 5μM | 200:1 | 1:2 |
| 25ng | 2.5μM | 200:1 | 1:4 |
| 1ng | 1μM | 200:1 | 1:10 |
* выражать через коэффициент тома переходника к разжижителю
2. Энзим используемый в смешивании PCR HIFI библиотеки 2× мастерском полимераза ДНК семьи b, которая имеет 5" - 3" полимераза и 3" - 5" деятельности при exonuclease, но нуждается 5" - 3" деятельности при exonuclease. Он имеет высокое качество аудио и однородность, и сильную устойчивую способность синтеза. Строгий контроль числа циклов амплификации особенно важен для выхода библиотеки. Следующая таблица показывает порекомендованное число циклов амплификации соответствие к различному количеству входного сигнала ДНК:
Число порекомендованное таблицей 2 циклов амплификации соответствие к различным входным сигналам образца
| ДНК входного сигнала | Порекомендованное число циклов амплификации | |
| библиотека 100ng | библиотека 1μg | |
| 1μg | 0 | 2-5 |
| 500ng | 0 | 2-5 |
| 250ng | 1-3 | 5-7 |
| 100ng | 2-4 | 6-8 |
| 50ng | 4-6 | 8-10 |
| 25ng | 5-7 | 9-12 |
| 10ng | 7-9 | 11-13 |
| 5ng | 9-11 | 13-14 |
| 2.5ng | 10-12 | 14-16 |
| 1ng | 11-13 | 15-17 |
Примечание: 1. Вышеуказанная таблица показывает результаты теста использующ 150bp стандартная ДНК, которая для ссылки только.
2. Если неполные соединители использованы, то минимальное количество циклов (1-3) должно быть усилено для того чтобы получить полную библиотеку.
3. Если качество ДНК входного сигнала плохо, или выбор размера унесен во время конструкции библиотеки, то число циклов амплификации должно соотвественно быть увеличено.
[Стандартный процесс конструкции библиотеки]
Ремонт конца
Примечание: Если разделенная ДНК превышает μl, то 45 прежде чем этот шаг, или буфер несовместимы с буфером ремонта конца, магнитное очищение шарика должно быть выполнено сперва.
1. Подготовьте следующую реакцию в трубке PCR 200 μl:
| Реагенты | Том |
| Разделенная ДНК | Переменная |
| Ремонт конца & смешивание -замыкать | μl 20 |
| ddH2 o | К μl 65 |
2. Вортекс нежно и закрутка вниз кратко, который нужно смешать хорошо, центрифуговать кратко и собрать полностью жидкость ко дну трубки.
3. Выполните следующую реакцию в термальном cycler:
| Температура | Время |
| 20°C | 15min |
| 65°C | 15min |
| 4°C | ∞ |
Перешнуровка переходника
1. Продолжайте с реакцией перешнуровки как можно скорее после подготовки конца.
2. Разбавьте переходник согласно таблице 1.
3. Подготовьте следующую систему реакции:
| Реагенты | Том |
| Ремонт конца и продукты -замыкать | μl 65 |
| Быстрый буфер перешнуровки | μl 25 |
| Быстрая лигаза ДНК | μl 5 |
| Переходник x для MGI | μl 5 |
| Итог | μl 100 |
4. Вортекс нежно и закрутка вниз кратко, который нужно смешать хорошо, центрифуговать кратко и собрать полностью жидкость ко дну трубки.
5. Выполните следующую реакцию в термальном cycler:
| Температура | Время |
| 20°C | 15min |
| 4°C | ∞ |
Порекомендованное решение для уборки PCR/выбора размера (специфический магнитный том шарика должен быть отрегулирован согласно фактическому размеру выборки)
1. Подготовьте 100 продуктов перешнуровки μl в соотвествующую трубку центрифуги.
2. Добавьте μl 100 ресуспензированных шариков выбора ДНК магнитных к образцу. Нежно дуновение с пипеткой для 10 раз (или вортекс для 30 s). Инкубируйте образцы на минута 5 на комнатной температуре.
3. Установите трубку на соотвествующем магнитном шкафе для того чтобы отделить шарики от супернатанта. Когда решение ясно, осторожно извлечь и сбросить супернатант с пипеткой (не сбросьте шарики).
4. Добавьте μl 200 этанола 80% свежо подготовленного к трубке пока в магнитном шкафе. Инкубируйте на комнатной температуре для 30 s, и после этого осторожно извлечь и сбросить супернатант (не нарушьте шарики).
5. Повторяйте раздел 4 раз для итога 2 мыть.
Примечание: Уверен извлечь полностью видимую жидкость после второго Вашингтона.
6. Воздух сушит шарики до тех пор пока поверхность магнитных шариков не будет иметь никакой очевидный лоск пока трубка на магнитном шкафе с крышкой открытой.
Примечание: Сделайте не overdry шарики, это смогите привести в более низком спасении ДНК. Когда шарики начинают треснуть, они слишком сухи.
7. Извлеките трубку из магнитного шкафа. Добавьте буфер вымывания 22 μl (Tris-HCl, pH8.0-8.5 10mM) к трубке. Смешайте хорошо путем капать из пипетки вверх и вниз по крайней мере 10 раз или на смесителе вортекса для 30 S. инкубирует на минута 3-5 на комнатной температуре.
8. Установите трубку на магнитном шкафе. После минуты 5 (или когда решение ясно), супернатант μl передачи 20 к новой трубке. Выбор выполнен, и выбранную ДНК можно использовать для последующих экспериментов или хранить на -20°C в течение длительного времени.
Амплификация библиотеки
1. Подготовьте следующую реакцию в трубке PCR 200 μl:
| Реагенты | Том |
| Продукты перешнуровки после выбора уборки или размера | μl 20 |
| Смешивание PCR HIFI библиотеки 2× мастерское | μl 25 |
| Смешивание праймера для MGI | μl 5 |
| Итог | μl 50 |
2. Вортекс нежно и закрутка вниз кратко, который нужно смешать хорошо, центрифуговать кратко и собрать полностью жидкость ко дну трубки.
3. Выполните следующую реакцию в термальном cycler:
| Температура | Время | Номер цикла |
| 95°C | 3min | 1 |
| 98°C | 20sec |
Отборное соотвествующее число циклов согласно таблице 2 |
| 60°C | 15sec | |
| 72°C | 30sec | |
| 72°C | 5min | 1 |
| 4°C | ∞ | - |
Порекомендованное решение для уборки PCR/выбора размера (специфический магнитный том шарика должен быть отрегулирован согласно фактическому размеру выборки)
1. Подготовьте 50 продуктов перешнуровки μl в соотвествующую трубку центрифуги.
2. Добавьте μl 45 ресуспензированных шариков выбора ДНК магнитных к образцу. Нежно дуновение с пипеткой для 10 раз (или вортекс для 30 s). Инкубируйте образцы на минута 5 на комнатной температуре.
3. Установите трубку на соотвествующем магнитном шкафе для того чтобы отделить шарики от супернатанта. Когда решение ясно, осторожно извлечь и сбросить супернатант с пипеткой (не сбросьте шарики).
4. Добавьте μl 200 этанола 80% свежо подготовленного к трубке пока в магнитном шкафе. Инкубируйте на комнатной температуре для 30 s, и после этого осторожно извлечь и сбросить супернатант (не нарушьте шарики).
5. Повторяйте раздел 4 раз для итога 2 мыть.
Примечание: Уверен извлечь полностью видимую жидкость после второго Вашингтона.
6. Воздух сушит шарики до тех пор пока поверхность магнитных шариков не будет иметь никакой очевидный лоск пока трубка на магнитном шкафе с крышкой открытой.
Примечание: Сделайте не overdry шарики, это смогите привести в более низком спасении ДНК. Когда шарики начинают треснуть, они слишком сухи.
7. Извлеките трубку из магнитного шкафа. Добавьте буфер вымывания 22 μl (Tris-HCl, pH8.0-8.5 10mM) к трубке. Смешайте хорошо путем капать из пипетки вверх и вниз по крайней мере 10 раз или на смесителе вортекса для 30 S. инкубирует на минута 3-5 на комнатной температуре.
8. Установите трубку на магнитном шкафе. После минуты 5 (или когда решение ясно), супернатант μl передачи 20 к новой трубке. Выбор выполнен, и выбранная ДНК можно хранить на 2-8°C на 1-2 недель или хранить на -20°C в течение длительного времени.
[Приложение] порекомендованная схема для двухстороннего выбора
Если двух-круглый выбор необходим, то мы обеспечиваем следующую схему для того чтобы выбрать соотвествующий магнитный том шарика согласно предполагаемому размеру библиотеки. Выбор размера можно выполнить перед ремонтом конца или после амплификации. Два или больше двух-круглый выбор значительно уменьшит выход библиотеки.
Заполните том библиотеки в таблице ниже к μl 100. Выберите том магнитных шариков в 2 кругах согласно предполагаемому размеру библиотеки. И унесите деятельность выбора согласно следующим инструкциям.
Количество порекомендованное таблицей 3 магнитных шариков для Двух-круглого выбора
| Предполагаемый размер библиотеки | 150bp | 200bp | 250bp | 300bp | 400bp | 500bp | 600bp | 700bp | |
| Том шариков (μl) | Круг 1 | 100 | 90 | 80 | 70 | 60 | 55 | 50 | 45 |
| Круг 2 | 30 | 20 | 20 | 20 | 20 | 15 | 15 | 15 | |
1. Заполните том библиотеки к μl 100 в трубке PCR 200μl и обозначенному как A. Добавление некоторый том магнитных шариков согласно таблице 3 (вокруг 1) к дуновению A. трубки Нежн с пипеткой для 30 S. инкубирует образцы на минута 5 на комнатной температуре.
2. Установите трубку a на соотвествующем магнитном шкафе для того чтобы отделить шарики от супернатанта. Когда решение ясно, осторожно извлеките супернатант к новой трубке и обозначьте его как шарики B. Сбрасывать.
3. Добавьте некоторый том магнитных шариков согласно таблице 3 (вокруг 2) к дуновению B. трубки Нежн с пипеткой для 30 S. инкубирует образцы на минута 5 на комнатной температуре. Установите трубку b на магнитном шкафе. Когда решение ясно, осторожно извлечь и сбросить супернатант.
4. Добавьте μl 200 этанола 80% свежо подготовленного к трубке b пока в магнитном шкафе. Инкубируйте на комнатной температуре для 30 s, и после этого осторожно извлечь и сбросить супернатант (не нарушьте шарики).
5. Повторяйте раздел 6 раз для итога 2 мыть.
Примечание: Уверен извлечь полностью видимую жидкость после второго Вашингтона.
6. Воздух сушит шарики до тех пор пока поверхность магнитных шариков не будет иметь никакой очевидный лоск пока трубка b на магнитном шкафе с крышкой открытой.
Примечание: Сделайте не overdry шарики, это смогите привести в более низком спасении ДНК. Когда шарики начинают треснуть, они слишком сухи.
7. Извлеките трубку b из магнитного шкафа. Добавьте буфер вымывания 22 μl к трубке. Смешайте хорошо путем капать из пипетки вверх и вниз по крайней мере 10 раз или на смесителе вортекса для 30 S. инкубирует на минута 3-5 на комнатной температуре.
Примечание: Если прицеленный захват не будет выполнен, то добавьте буфер вымывания (Tris-HCl 10mM, пэ-аш 8.0-8.5) для вымывания. В противном случае, простерилизованная ultrapure вода должна быть использована для вымывания.
- Трубка b места на магнитном шкафе. Супернатант μl передачи 20 к новой трубке.
Для пользы исследования только
GDSBio высокотехнологичное предприятие фокусируя на научных исследованиях и разработки, продукции и продажах высококачественных продуктов наук о жизни. Компания имеет полную номенклатуру товаров, с технологией PCR как ядр, фокусируя на PCR генерала, хранение PCR флуоресцирования количественное, NGS, нуклеиновый кисловочный электрофорез и другие технологии молекулярной биологии, и начинала молекулярные реагенты исследования, молекулярное in vitro диагностическое сырье, реагенты нуклеинового кисловочного извлечения и обнаружения и другие продукты.
